大小鼠腫瘤切片模具的操作、實(shí)驗(yàn)試劑以及方法
更新時(shí)間：2018-12-24 點(diǎn)擊次數(shù)：3325次
大小鼠腫瘤切片模具的操作、實(shí)驗(yàn)試劑以及方法
大小鼠腫瘤切片模具包括大鼠腦模具和小鼠腦模具。腦模具經(jīng)過精密機(jī)械加工和高度拋光,可確保切片過程的可重復(fù)性。使用材料為不銹鋼,結(jié)實(shí)耐用,可被加熱、冷卻、高壓滅菌(只限不銹鋼型)、擦洗,經(jīng)得起苛刻的使用條件。冠狀腦模具具有矢狀中線,可方便的分離左右腦半球。切片精度至1mm,小鼠腦模具也適用于新生大鼠。
如何進(jìn)行大小鼠腫瘤切片模具模型的建立及鑒定實(shí)驗(yàn)?zāi)[瘤學(xué)的需要導(dǎo)致腫瘤動物模型的產(chǎn)生,借以研究人類腫瘤的病因、發(fā)生、發(fā)展以及治療和預(yù)防。大小鼠腫瘤切片模具可來自于動物的自發(fā)腫瘤、誘發(fā)腫瘤和移植性腫瘤。
一前兩者由于對動物品系要求嚴(yán)格、實(shí)驗(yàn)周期較長或缺少實(shí)驗(yàn)一致性而較少使用。大小鼠腫瘤切片模具具有特性明確、生長一致性好、實(shí)驗(yàn)周期短、瘤株分布廣泛、可反復(fù)復(fù)制等優(yōu)點(diǎn),在腫瘤研究中占有重要地位。可移植性腫瘤,是把動物或人的腫瘤移植到同系、同種或異種動物,經(jīng)傳代后,組織類型和生長特性已趨穩(wěn)定,并能在受體動物中繼續(xù)傳代,又稱為可移植性腫瘤細(xì)胞。
二可移植性腫瘤移植于同系或同種動物,稱為同種移植,是常用的腫瘤動物模型復(fù)制方法之一。同種移植的優(yōu)點(diǎn)是,可供選擇使用的細(xì)胞系或細(xì)胞株多,許多細(xì)胞系在世界范圍分布廣泛,并且這些細(xì)胞的生物學(xué)特性已經(jīng)比較明確,一般都有明確的背景資料,使一群動物同時(shí)接種同樣量的瘤細(xì)胞,生長速度一致、個(gè)體差異較小,成活率高,易于對照觀察,這些都是便于科研成果相互比較和交流的有利因素
三在接種過程中，應(yīng)把握注射深度，否則易造成內(nèi)臟損傷。接種后三天即開始觀察有無腫瘤形成。本實(shí)驗(yàn)具有周期短、制作方便、成功率比較高、較好重復(fù)性和穩(wěn)定性的明顯優(yōu)勢，是一種較為理想的腫瘤實(shí)驗(yàn)動物模型，值得推廣。
二.大小鼠腫瘤切片模具的實(shí)驗(yàn)試劑以及方法
大小鼠腫瘤切片模具模型的建立：
抗腫瘤藥物及制劑的藥效學(xué)評價(jià)，可通過建立小鼠荷瘤數(shù)據(jù)模型，探索腫瘤生長的本質(zhì)及其發(fā)生發(fā)展的規(guī)律，探究其抗腫瘤效果。
方法：
小鼠右腋下注射H22腫瘤細(xì)胞，注射部位發(fā)生癌變，小鼠腫瘤生長明顯，切片結(jié)果證明實(shí)驗(yàn)成功，模型構(gòu)建完成，使小鼠荷瘤，觀察腫瘤生長，記錄體重?cái)?shù)據(jù)并建立動物模型。
取20只昆明鼠隨機(jī)分成A組（10只），B組（5只），C組對照組（5只），編號飼養(yǎng)。
1.1.2試劑：
無菌水，生理鹽水，臺酚藍(lán)，2%冰醋酸，甲醛，乙醇，二甲苯，石蠟等。
1.1.3儀器：
離心機(jī)，顯微鏡，計(jì)數(shù)板，電子稱，超凈工作臺，溫箱，切片機(jī)等。
三.實(shí)驗(yàn)步驟
取H22腫瘤細(xì)胞，3000轉(zhuǎn)離心分鐘，再用無菌生理鹽水洗滌腫瘤細(xì)胞3次，并做適當(dāng)稀釋，取40微升細(xì)胞懸液加入10微升0.4%臺酚藍(lán)染色并鏡檢計(jì)數(shù)，制成濃度為3*106個(gè)/ml的腫瘤細(xì)胞懸液，每只小鼠右腋皮下接種腫瘤細(xì)胞懸液0.2毫升。
細(xì)胞計(jì)數(shù)液2%冰醋酸溶液。取50微升細(xì)胞懸液加入450微升的細(xì)胞計(jì)數(shù)液中計(jì)數(shù)。
接種完成后,逐日觀察接種部位有無感染,腫瘤生長后有無自然消退,用游標(biāo)卡尺，每周測量腫瘤長徑a和短徑b,并計(jì)算平均直徑,即r=(a+b)/2，每天稱量小鼠體重和腫瘤并記錄，繪制曲線。
1.4制備組織切片：
a處死小鼠，將腫瘤組織切成1*1*0.4cm的小塊。
b將切塊的組織置于螺口瓶中，加入40%甲醛固定，過夜。
c固定完成后，倒出固定液，立即換上新鮮的70%乙醇，洗脫兩次，室溫放置20分鐘，繼而以75%，80%，85%，90%，95%，100%乙醇脫水各兩次，每次20分鐘。
d從新鮮二甲苯除去乙醇，放置2次，每次10分鐘。
e將樣品置于60℃溫箱中融化石蠟4次，每次1.5小時(shí)。
f將準(zhǔn)備好的包埋工具，用一熱玻璃吸管加入融化的石蠟，再用熱鑷子快速將樣品移至充滿石蠟的模具中，置于室溫，使起*凝結(jié)。
g從包埋模具中取出石蠟塊，放于室溫干燥處，切片
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